Examinando por Autor "Luis, O. de"

Mostrando 1 - 6 de 6

Alpha-dystroglycan glycosylation: man1A1 mannosidase implication in cancer.
(XXXII Congreso de la Sociedad Española de Bioquímica y Biología Molecular., 2009-09) Tarilonte, P.; González, L.; Fano, O.; Raducu, M.; Izquierdo, A.; Luis, O. de; Coloma, A.; Cruces, J.
Dystroglycan (DG) is a membrane receptor, involved in physically connecting extracellular matrix (ECM) to cytoskeleton. It was first described in muscular tissue 15 years ago, but nowadays functions in other tissues have been described for DG: it is the gate for arenaviruses to enter the cell, it is involved in embryogenesis, cell signalling, and cancer progression, although it is well-known as being on the basis of secondary dystroglycanopathies. Cell migration or adhesion defects are common in all the fields in which DG is involved.The interaction between DG and the ECM come through the O-mannosylglycan chains present in its mucin region. Alterations in these glycosylic chains are the known cause of secondary dystroglycanopathies and the defects in cell migration. The attachment to basal membranes is the key to keep physiological tissue architecture, and the miss-matching of it, is one the first steps taken by tumoral cells to go on the metastatic process. Hypoglycosylation of ¿-DG has been reported in several tumor and tumor cell lines. Determining the causes involved in the alteration of DG glycosylation, will be a key to understand these processes. The fact that many cancer cell lines and tumors present mannosidases over-expressed in their cancer signatures, lead us to think about their possible implication in breaking DG O-mannosyglycan chains. In this work we have tried to determine the possible implication of MAN1a1 mannosidase, deglycosylating DG, in the progression of cancerous processes.
Caracterización clínica y molecular de un paciente MEB español: Nueva confirmación de la exclusividad de POMGNT1 como causante de la enfermedad
(XXXII Congreso de la Sociedad Española de Bioquímica y Biologia Molecular, 2009-09) Raducu, M.; Fano, O.; Cotarelo, R.P.; Lendinez, C.; Tarilonte, P.; Izquierdo, A.; Luis, O. de; Coloma, A.; Cruces, J.
La Enfermedad Músculo-Ojo-Cerebro (MEB, MIM 253280) pertenece a un nuevo grupo de distrofias musculares congénitas denominado distroglicanopatías, y caracterizado por fallos en la O-glicosilación del distroglicano (DG), una proteína integral de membrana plasmática altamente glicosilada y compuesta por dos subunidades: a y b-DG. El DG es el componente central del Complejo Glicoproteico de Unión a Distrofina (DGC) en el músculo esquelético y realiza, a través de los residuos glicosilicos del a-DG, la unión entre la laminina de la matriz extracelular y el citoesqueleto de F-actina. En mamíferos la O-manosilación es un proceso post-traducciónal no muy frecuente y que afecta a un número limitado de glicoproteínas de cerebro, sistema nervioso y músculo esquelético, por lo tanto problemas en la O-manosilación generan distrofia muscular y migración neuronal anormal. MEB es una enfermedad autosómica recesiva caracterizada por distrofía muscular congénita con afectación cerebral y ocular, causada por mutaciones en el gen POMGnT1 que codifica la glicosiltransferasa: O-manosa b-1,2-N-acetilglucosaminiltransferasa 1 que cataliza la transferencia de N-acetilglucosamina sobre residuos de O-manosa unidas a grupos OH de serinas o treoninas de glicoproteinas. Describimos el caso de un paciente español con fenotipo característico de MEB. La tinción HE sobre biopsia muscular del paciente revela un patrón distrófico y el estado hipoglicosilado del a-DG se ha evidenciado mediante ensayos de Western-blot e Inmunohistoquímica. El rastreo mutacional del gen POMGnT1 ha detectado dos mutaciones en heterocigosis, una de ellas es nueva, afecta al dominio catalítico de la enzima y genera un codon de parada prematuro dando lugar a una proteína mas corta.
Entraining synthetic genetic oscillators
(Chaos., 2009) Wagemakers, A.; Buldú, J.M.; Sanjuán, M.A.F.; Luis, O. de; Izquierdo, A.
We propose a new approach for synchronizing a population of synthetic genetic oscillators, which consists in the entrainment of a colony of repressilators by external modulation. We present a model where the repressilator dynamics is affected by periodic changes in temperature. We introduce an additional plasmid in the bacteria in order to correlate the temperature variations with the enhancement of the transcription rate of a certain gene. This can be done by introducing a promoter that is related to the heat shock response. This way, the expression of that gene results in a protein that enhances the overall oscillations. Numerical results show coherent oscillations of the population for a certain range of the external frequency, which is in turn related to the natural oscillation frequency of the modified repressilator. Finally we study the transient times related with the loss of synchronization and we discuss possible applications in biotechnology of large-scale production coupled to synchronization events induced by heat shock.
Expresión de los genes implicados en la glicosilación del alfa-distroglicano en el desarrollo embrionario del pollo (gallus gallus).
(XXXII Congreso de la Sociedad Española de Bioquímica y Biología Molecular., 2009-09) Izquierdo, A.; Luis, O. de; Gómez-Esquer, F.; Tarilonte, P.; Fano, O.; Raducu, M.; Cruces, J.; Coloma, A.
El distroglicano es el componente fundamental del complejo de glicoproteínas de unión a distrofina, sirviendo de puente entre el citoesqueleto de actina y la matriz extracelular en células musculares y en neuronas. El distroglicano es una glicoproteína formada por dos subunidades alfa y beta unidas por uniones no covalentes. El déficit de glicosilación del alfa-distroglicano da lugar a un tipo de distrofias musculares congénitas con afectación neuronal y ocular, denominadas alfa-distroglicanopatías y que en orden de mayor a menor gravedad son el Síndrome de Walker-Warburg (WWS), la enfermedad músculo-ojo-cererebro (MEB), la distrofia muscular congénita de Fukuyama (FCMD),las distrofias congénitas 1D y 1C (MDC1D y MDC1C)y las 5 distrofias musculares congénitas de cintura 2I a 2N (LGMD2I-2N) excepto 2J, no implicada en ditroglicanopatías. Para estas enfermedades se ha descrito alteraciones en los genes POMT1, POMT2, POMGnT1, que codifican glicosiltransferasas, y fukutina, FKRP y LARGE que codifican proteínas con aparente función glicosiltransferasa por caracterizar. En el presente trabajo hemos abordado el estudio de la expresión de estos genes durante el desarrollo embrionario del pollo mediante ensayos de RTPCR cuantitativa, tanto en embriones completos como por órganos específicos. Los resultados muestran que estos genes se expresan mayoritariamente entre los estadios 26 al 38 del desarrollo embrionario del pollo, presentando una mayor expresión en encéfalo, músculo esquelético y músculo cardiaco. Estos resultados son consistentes con las afectaciones encontradas en pacientes de distroglicanopatías, y ponen de manifiesto la utilidad del embrión de pollo como sistema modelo para el estudio del papel de estos seis genes en la O-glicosilación del alfa-distroglicano.
Inducción por choque térmico en una población de osciladores genéticos: modelos y experimentos.
(XXXII Bienal de Física de la Real Sociedad Española de Física., 2009-09) Luis, O. de; Izquierdo, A.; Wagemakers, A.; Buldú, J.M.; Coloma, A.; Sanjuán, M.A.F.
En esta comunicación proponemos la respuesta celular al choque térmico como método para inducir oscilaciones sincronizadas en una población de osciladores genéticos conocidos como represiladores. Este tipo de oscilador, hospedado en la bacteria E. coli, presenta oscilaciones autónomas e independientes del ciclo celular y que son observables a nivel poblacional mediante la detección de emisión de fluorescencia por la proteína amarilla fluorescente (YFP) producida por el represilador. Las bacterias sometidas a un choque térmico de 50ºC y de una duración de entre 30 y 60 minutos muestran oscilaciones a nivel poblacional bajo las condiciones experimentales adecuadas. Entre los parámetros de control que hemos analizados se encuentran la temperatura de incubación y densidad del cultivo bacteriano, la duración del choque térmico y su temperatura. Por otro lado, hemos comparado este tipo de forzamiento con el inducido por IPTG, mostrando que el forzamiento térmico es mucho más eficaz que el químico. Con el fin de comprender la dinámica observada experimentalmente, hemos desarrollado un modelo matemático que describe la dinámica de una población de represiladores sometidos a forzamiento térmico. El modelo, inspirado en el propuesto originalmente por Elowitz y Leibler (2000) ha sido modificado para incluir los procesos de división celular y reflejar la influencia del crecimiento de la población en las oscilaciones globales. El modelo reproduce de manera satisfactoria los resultados obtenidos en el laboratorio donde el nivel de fluorescencia registrado mediante un escáner nos indica la dinámica oscilante de la población. En la Figura 1 mostramos un ejemplo de correspondencia entre experimentos y simulaciones numéricas. Las principales características dinámicas del sistema están recogidas en el modelo, es decir, las oscilaciones periódicas y el incremento de la fluorescencia debido al crecimiento celular.
Sincronización en redes genéticas sintéticas.
(XXXI Congreso de la Sociedad Española de Bioquímica y Biología Molecular., 2008-09) Luis, O. de; Izquierdo, A.; Wagemakers, A.; Buldú, J.M.; Sanjuán, M.A.F.; Coloma, A.
La modelización de redes génicas pretende analizar la dinámica temporal de las interacciones entre promotores génicos, factores reguladores de la transcripción y expresión génica resultante, permitiendo comprender la respuesta de la red génica a distintos estímulos externos. Utilizamos una variante de la red génica descrita por Elowitz y Leibler (Nature, 2000;403:335-8), denominada represilador. Consiste en un plásmido bacteriano conteniendo tres genes de regulación cerrada entre sí: el producto del gen 1 inhibe la expresión del gen 2, el producto del gen 2 la del gen 3, y el del gen 3 la del gen 1. El estado de represión de la red se detecta por expresión del marcador YFP, situado en un segundo plásmido y de expresión reprimida por el producto del 3er gen. Las variaciones de intensidad en la emisión fluorescente permiten deducir su dinámica temporal. En el primer represilador descrito se estudiaba la sincronización de dinámicas en bacterias individuales en respuesta a IPTG, añadido al medio para dersreprimir la transcripción del primer gen de la red. La sincronización obtenida es transmisible en la división celular, pero no perdurable: las oscilaciones individuales en breve vuelven a presentar frecuencias diferentes. Nuestro propósito es forzar la sincronización perdurable mediante choque térmico. Hemos estudiado la respuesta endógena al choque térmico en poblaciones de bacterias portadoras del represilador, comparativamente con su inducción mediante IPTG y sin inducción alguna, observando sincronización específica. Actualmente trabajamos en incorporar a la red un tercer plásmido con uno de los genes del represilador bajo control del promotor de la chaperona groE, proteína de la familia génica de las HSPs, para forzar sincronización robusta por choque térmico.