MOLECULAR CHARACTERIZATION OF BIOLOGIC AND TARGETED SYNTHETIC DMARDS EFFECTS THROUGH EX-VIVO STUDIES IN RHEUMATOID ARTHRITIS IMMUNE CELLS.

Abstract

Antecedentes: A pesar de los avances en el tratamiento de la artritis reumatoide (AR), una proporción significativa de pacientes (10-30%) no responde a los medicamentos actuales, incluidos los biológicos. Una mejor caracterización de los efectos moleculares promovidos por los fármacos podría contribuir al desarrollo de estrategias terapéuticas personalizadas. Objetivos: 1- Caracterizar los cambios moleculares promovidos por TNFi, IL6Ri y JAKinibs utilizando ensayos ex-vivo en células inmunes de AR. 2- Identificar subgrupos de pacientes con AR con enfermedad activa que presenten firmas moleculares asociadas a las moduladas por los fármacos. Métodos: Células mononucleares de sangre periférica (PBMC) y neutrófilos de 15 pacientes con AR activa fueron cultivados (24h y 12h, respectivamente), con suero autólogo y con etanercept, sarilumab o baricitinib (todos 10 micromolar). Los cambios en la proliferación y adhesión celular en PBMC se midieron con kits comerciales específicos. Los cambios en la expresión de proteínas promovidos por cada fármaco se evaluaron en los sobrenadantes mediante la tecnología de ensayo de extensión de proximidad (PEA) (Olink), analizando un panel de 92 proteínas relacionadas con la inflamación. Para identificar si las firmas proteómicas susceptibles de ser moduladas por los fármacos estaban presentes en pacientes con enfermedad activa, analizamos el mismo perfil inflamatorio en el suero de 183 pacientes con AR. Resultados: TNFi, IL6Ri y Jakinibs inhibieron con eficacia similar la proliferación y la adhesión en PBMC de aproximadamente el 65% de los pacientes con AR. El suero autólogo aumentó la secreción de proteínas inflamatorias por las PBMC y los neutrófilos de la AR, mientras que cada fármaco promovió cambios específicos de las firmas proteómicas. Así, TNFi, IL6Ri y JAKinibs redujeron diferentes conjuntos de citocinas, quimiocinas y factores de crecimiento, con sólo tres reducidos (IL7, TNF, FGF23) por los tres inhibidores. Por último, el análisis del proteoma inflamatorio circulante reveló que aproximadamente el 61% de los pacientes con AR activa presentaban al menos una firma proteómica alterada asociada a la modulada ex vivo por cualquiera de los fármacos. En particular, el 20% de los pacientes presentaba una firma proteómica alterada modulada ex vivo por los 3 fármacos, el 19% con dos de ellos y el 22% con un solo fármaco preciso. Conclusiones: Los cambios celulares y moleculares distintivos promovidos por TNFi, IL6Ri y JAKinibs en ensayos ex vivo de células inmunes de AR, fueron consistentes con perfiles séricos alterados específicos observados en subgrupos de pacientes activos con AR. Estas observaciones aportan pruebas convincentes sobre el potencial terapéutico de cada tratamiento, ya que concuerdan con las alteraciones específicas del perfil molecular que presentan los pacientes individuales al inicio del tratamiento.