Descripción y evaluación de un método para descelularizar la mucosa aislada del colon de la rata y la posible aplicación de ésta en ingeniería de tejidos

Abstract

En ingeniería de tejidos el uso de soportes o armazones (¿scaffolds¿) constituye un requisito básico. Gracias a la capacidad de ser reabsorbidos por el organismo donde se implantan, los armazones derivados de la matriz extracelular (ECM) de órganos apropiados disfrutan actualmente de gran predicamento. Existe una abundante bibliografía sobre preparación y uso de ECM de órganos tales como intestino delgado, esófago, vejiga urinaria,... etc. Esta diversidad se debe a que el éxito de la reconstrucción del órgano determinado depende en buena parte de la anatomía del armazón utilizado. El presente estudio propone por primera vez el uso de la mucosa de colon aislada como ¿scaffold¿ para ingeniería tisular. Se describen la preparación y aislamiento de la mucosa, así como los ensayos realizados para descelularizar la mucosa. Un objetivo principal de este trabajo fue el conseguir una descelularización completa pero al mismo tiempo conservando la membrana basal superficial, como substrato para sembrar sobre ella células para un nuevo constructo. Esta circunstancia constituye un hecho diferencial respecto de los muchos métodos conocidos. El procedimiento de descelularización contempla el uso de un agente quelante, seguido de detergentes y prescindiendo completamente de enzimas hidrolíticas. Los efectos de estos agentes especialmente sobre la membrana basal se han estudiado mediante técnicas de inmunohistoquímica y microscopía electrónica de transmisión y barrido de alta resolución, sirviendo los resultados obtenidos para configurar el protocolo de descelularización idóneo para la mucosa del colon de la rata. Con estas técnicas, además, se confirma la persistencia de la membrana basal, y se documentan los efectos de los detergentes sobre la misma, que la afectan sobre todo en el lado epitelial de la misma, un hecho hasta ahora no descrito. Los resultados indican que el protocolo óptimo para la mucosa del colon lo constituye la aplicación secuencial del quelante seguida del tratamiento con detergentes de dos tipos (Triton X-100, SDS). Tras este tratamiento se demuestra que la membrana basal está conservada y que células son capaces de adherirse y crecer sobre ella. En conclusión, esta investigación muestra que la mucosa aislada del colon constituye un nuevo soporte o ¿scaffold¿ capaz de ser usado ventajosamente en ingeniería de tejidos.